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PCR體系及各類常見PCR辨析

聚合酶鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReaction)簡稱PCR，是一種體外高效擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。該技術(shù)的發(fā)明人是KaryMullis，他從1983年開始研究PCR技術(shù)，1985年開始被逐漸采用，成為分子生物學(xué)的一項常規(guī)手段，并得到了廣泛的應(yīng)用，在臨床診斷、生物醫(yī)學(xué)研究和法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域都具有重要意義。PCR是在體外模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的過程，它用加熱的辦法讓需要擴(kuò)增的DNA片段變性解鏈成兩條單鏈，人工合成的一對引物讓它們結(jié)合到DNA模板（分別結(jié)合到兩條鏈上...

常用于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型

轉(zhuǎn)染，顧名思義，是指將某種物質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)，是分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的重要技術(shù)。在生物醫(yī)學(xué)研究中，這個“物質(zhì)”通常指的是DNA或RNA。通過轉(zhuǎn)染，我們可以向細(xì)胞引入新的基因，或者沉默或敲低細(xì)胞內(nèi)的某個基因，從而進(jìn)行基因功能研究、基因表達(dá)調(diào)控，或是進(jìn)行基因治療等。在實(shí)驗(yàn)過程中，選擇哪種細(xì)胞受體也有一定要求，本期我們就來了解一下常用于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型有哪些吧？常用于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞包括原代細(xì)胞、原代細(xì)胞衍生物、腫瘤細(xì)胞系、幼倉鼠腎細(xì)胞（BHK-21）、人胚腎細(xì)胞（HEK-293）、人...

PEI轉(zhuǎn)染試劑的作用原理及比較

目前，將外源DNA導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞的方法大致可分為兩大類，即生物方法和物理化學(xué)方法。生物方法主要以病毒作為載體，通過病毒感染的方式將外源DNA導(dǎo)入到細(xì)胞中，其中以逆轉(zhuǎn)錄病毒及腺病毒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)最為常用。物理化學(xué)方法中常用的有磷酸鈣法、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、顯微注射、電穿孔，以及最近出現(xiàn)的以高分子聚合物為載體的基因傳遞技術(shù)。其中常用的是化學(xué)方法，磷酸鈣、聚乙烯亞胺（PEI）、脂質(zhì)體等化學(xué)試劑較為常用，那么接下來著重探討一下PEI轉(zhuǎn)染試劑的作用原理及比較吧。PEI轉(zhuǎn)染試劑的作用原理使用廣...

怎樣培養(yǎng)造血干細(xì)胞呢？

造血干細(xì)胞(Hemopoieticstemcells,HSC)有高度的自我更新和多向分化潛能，可以產(chǎn)生所有成熟的血細(xì)胞，如紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板和淋巴細(xì)胞等，并且具有重建整個造血系統(tǒng)的潛能。可根據(jù)其來源將其分類為臍帶血造血干細(xì)胞、骨髓造血干細(xì)胞、外周血造血干細(xì)胞。在眾多研究和臨床應(yīng)用中，造血干細(xì)胞被廣泛用于治療急性白血病等血液系統(tǒng)疾病。由于其來源部位獲得不易，造血干細(xì)胞十分珍貴，所以其體外擴(kuò)增既要保持自我更新能力的同時還要阻止其分化。怎樣培養(yǎng)造血干細(xì)胞呢？近年來大量實(shí)驗(yàn)表明，...

誘導(dǎo)多能干細(xì)胞你知多少？

誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（inducedpluripotentstemcells，iPSCs）是近年來干細(xì)胞研究和臨床治療領(lǐng)域的熱門課題，為再生醫(yī)學(xué)和醫(yī)藥技術(shù)的發(fā)展提供了新的機(jī)會，具有里程碑意義。那么關(guān)于誘導(dǎo)多能干細(xì)胞你知多少？什么是誘導(dǎo)多能干細(xì)胞指由數(shù)個重編程基因?qū)肴梭w細(xì)胞逐步誘導(dǎo)獲得，不涉及倫理，且具備胚胎干細(xì)胞（ESCs）無限更新增殖和向所有細(xì)胞組織器官分化的能力，可以分化出這個人的血細(xì)胞，骨細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞等，進(jìn)而培養(yǎng)出這個人的臟器，骨頭，眼角膜等。因此iPSCs又被稱為人造胚...

蛋白Marker的常見問題解答

蛋白Marker即蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，是一些已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物，像“尺子”一樣用來指示蛋白質(zhì)條帶的大小。在WesternBlot過程中，分子量Marker就像個螺絲釘一樣雖然是其中小小的一環(huán)，然而就是這樣一個小細(xì)節(jié)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著不可忽視的作用。Marker的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小，只有標(biāo)準(zhǔn)量精確無誤了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力，除此之外，蛋白Marker還有顯示轉(zhuǎn)膜是否成功、以及蛋白在凝膠上的電泳程度等作用，因此選擇正確的蛋白Marker也是Western...

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中為什么要“慢凍快融”呢？

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇是在細(xì)胞研究和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中常見的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于長期保存和重復(fù)使用細(xì)胞。此步驟是細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，直接影響細(xì)胞存活率和活力，關(guān)系到后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癜凑沼媱澯行У剡M(jìn)行。要想做好細(xì)胞凍存和復(fù)蘇，首先請牢記下面這四個字：慢凍快融！慢凍快融！慢凍快融！重要的事情說三遍！那么細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中為什么要“慢凍快融”呢？凍存細(xì)胞時，細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境中的水會形成冰晶。如果直接將細(xì)胞凍存到-196℃的液氮中，由于凍結(jié)過程中胞外溶液中的水先結(jié)冰，使胞外溶液不斷濃縮，引起細(xì)胞電解質(zhì)升高、滲透...

如何讓細(xì)胞“凍”起來？

在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，我們通常通過凍存的手段讓細(xì)胞代謝變得緩慢，從而達(dá)到長期保存或保種的目的，以供后續(xù)實(shí)驗(yàn)的使用，那么如何讓細(xì)胞“凍”起來使之不變與永恒逐漸成為一個熱門話題，接下來一起來探究一下吧！【低溫儲存】隨著細(xì)胞被冷凍至冰點(diǎn)以下，懸液中冰晶和溶質(zhì)的濃度有所增加。如果冷卻過程中，胞內(nèi)水分可以滲出細(xì)胞，則可以減少胞內(nèi)冰晶。通常1℃/min的降溫速度可以促進(jìn)此過程。但是，水分的喪失會導(dǎo)致細(xì)胞收縮，當(dāng)這種收縮達(dá)到一定程度，又會導(dǎo)致細(xì)胞活性的劇烈下降。冷凍保護(hù)劑，如甘油或者二甲基亞砜（D...