293T HCP ELISA 檢測試劑盒說明書

貨號：HG-HCP001

本試劑僅用于檢測樣本中293T HCP組分的含量。

產(chǎn)品簡介：

本品采用雙抗夾心法檢測樣本中293T HCP含量，將293T抗體預(yù)包被在微孔板上，將標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本加入到已包被的反應(yīng)孔內(nèi)進(jìn)行孵育。存在的293T蛋白會(huì)定量的與微孔板中的抗體結(jié)合，洗滌除去未結(jié)合物，加入生物i素標(biāo)記的抗293T蛋白抗體，最后加入親和素標(biāo)記HRP，形成抗體-抗原-生物i素抗體-酶標(biāo)親和素復(fù)合物，通過TMB顯色程度指示樣品中蛋白含量。使用前請仔細(xì)閱讀說明書并檢查試劑盒組分。
檢測范圍： 37-27000 ng/mL
定  量  限： 37ng/mL
精  密  度： CV%≤10%, RE%≤±15%

規(guī)格：

96 T

應(yīng)用：

本試劑盒采用雙抗夾心法定量分析以293T為表達(dá)細(xì)胞的生物藥中宿主蛋白雜質(zhì)，可檢測293T宿主蛋白雜質(zhì)所需要的全部組分。

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品儲(chǔ)存條件與有限期：

2~8℃避光保存，有效期8個(gè)月。

需要準(zhǔn)備材料：

◆?酶標(biāo)儀
◆ 去離子水
◆ 微孔板恒溫振蕩器
◆ 全新濾紙
◆ 微量加液器及吸頭
◆ 渦旋振蕩器

試劑配制：

1.平衡： 將所需試劑移到室溫（18~25℃）平衡30分鐘。
2.配液：
?1×PBS-T 洗滌液：計(jì)算實(shí)驗(yàn)所需工作液體積，取適量 10×PBS-T 洗液，用去離子水進(jìn)行 10 倍稀釋，混勻后備用；
?稀釋液工作溶液：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求取適量稀釋液干粉按（1g/100mL）的比例，用 1× PBS-T 溶解混勻，也可一次性稀釋后分裝，放置 -20 ℃保存。避免稀釋液反復(fù)凍融。
③檢測抗體工作液：計(jì)算實(shí)驗(yàn)所需工作液體積，取適量生物i素抗體用稀釋液進(jìn)行100倍稀釋，充分混勻備用；
④酶結(jié)合物工作液：計(jì)算實(shí)驗(yàn)所需工作液體積，取適量酶結(jié)合物用稀釋液進(jìn)行10倍稀釋，充分混勻備用；
⑤標(biāo)準(zhǔn)品及樣品使用稀釋液進(jìn)行稀釋。
3.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.使用前，將所有試劑充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
2.根據(jù)實(shí)驗(yàn)孔數(shù)量，確定所需的板條數(shù)目，剩余板條放回含干燥劑的鋁箔袋，密封。
3.加樣: 每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品、樣品、陰性對照至相應(yīng)孔中。用封板膜封板后在室溫（18~25℃）下反應(yīng)1.5h。

4.洗滌: 棄去各孔內(nèi)液體，用1×PBS-T洗滌液注滿微孔（250μL/孔），靜置30秒后棄去孔內(nèi)液體；重復(fù)3次，每一次洗板完成后在濾紙上拍干。
5.加生物i素檢測抗體工作液: 每孔加生物i素檢測抗體工作液100μL，用封板膜封板后室溫（18~25℃）下反應(yīng)45分鐘。
6.洗滌: 棄去各孔內(nèi)液體，用1×PBS-T洗滌液注滿微孔（250μL/孔），靜置30秒后棄去孔內(nèi)液體；重復(fù)3次，每一次洗板完成后在面巾紙上拍干。
7.加酶結(jié)合物工作液: 每孔加酶結(jié)合物工作液100μL，用封板膜封板后室溫（18~25℃）下反應(yīng)30分鐘。
8.洗滌: 棄去各孔內(nèi)液體，用1×PBS-T洗滌液注滿微孔（250μL/孔），靜置2 min后棄去孔內(nèi)液體；重復(fù)3次，每一次洗板完成后在面巾紙上拍干。
9.顯色: 每孔分別加底物顯色液100μL，輕微振蕩混勻后用封板膜封板置25℃避光顯色15分鐘。
10.測定: 每孔加終止液100μL，輕微混勻。選擇酶標(biāo)儀主波長450nm，測定各孔吸光值（OD值）。

結(jié)果分析：

本產(chǎn)品建議采用四參數(shù)的擬合方式進(jìn)行線性擬合及計(jì)算。

標(biāo)準(zhǔn)曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實(shí)際測定為準(zhǔn)）：

注意事項(xiàng)

1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明儲(chǔ)存，使用前室溫（18-25℃）平衡。
2. 預(yù)包被板條使用前，請平衡至室溫再打開外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝中密閉封口， 4℃可保存一個(gè)月。其余不用試劑應(yīng)包裝好或蓋好。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品、生物i素及酶結(jié)合物體積量很小，使用前請短暫離心，以使管壁或管蓋的液體沉積到管底。
4. 實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
5. 使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要。
6. 洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應(yīng)孔中吸水。
7. 底物顯色液對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。
8. 本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請?jiān)谛趦?nèi)使用。